As neoplasias mieloides são doenças malignas caracterizadas pela proliferação descontrolada de células-tronco hematopoiéticas, células progenitoras e células maduras dos tecidos hematopoiéticos.
O diagnóstico das neoplasias mieloides é baseado em critérios clínicos, hematológicos, citogenéticos, moleculares e histopatológicos. Nas últimas décadas, avanços significativos foram conquistados acerca do diagnóstico e tratamento dessas doenças, possibilitando a identificação de marcadores moleculares específicos e mutações genéticas associadas.
Toda essa evolução permitiu um melhor diagnóstico e uma estratificação de risco cada vez mais precisa e individualizada. Nesse contexto, a incorporação de modernos painéis genéticos baseados na tecnologia de Sequenciamento de Nova Geração (NGS) representa uma potente ferramenta que auxilia o médico a diagnosticar e selecionar tratamentos mais adequados e eficazes para cada paciente.
Neste conteúdo, abordaremos em mais detalhes o painel genético de neoplasias mieloides, trazendo informações sobre sua aplicação clínica e como o exame é realizado.
Quais os principais tipos de neoplasias mieloides?
As neoplasias mieloides podem ser categorizadas em três tipos principais: neoplasias mieloproliferativas crônicas, neoplasia mielodisplásica (SMD) e leucemia mieloide aguda. A seguir, será descrita brevemente cada uma delas.
Neoplasias mieloproliferativas crônicas
As neoplasias mieloproliferativas crônicas são um grupo de neoplasias hematopoiéticas clonais que incluem a policitemia vera, a trombocitemia essencial, a mielofibrose primária e a leucemia mieloide crônica. São condições associadas à proliferação anormal de uma ou mais linhagens mieloides diferenciadas em sangue periférico.
Neoplasias mielodisplásicas (SMD)
As neoplasias mielodisplásicas referem-se a distúrbios clonais de células progenitoras pluripotentes, apresentando contagens de células sanguíneas abaixo do normal, displasia em células eritroides, granulócitos ou megacariócitos, podendo ou não apresentar aumento da porcentagem de blastos em medula óssea. Em geral, possuem início insidioso, porém podem evoluir para leucemia mieloide aguda.
Leucemia mieloide aguda
A leucemia mieloide aguda pode ser classificada em diferentes subtipos, de acordo com achados imunofenotípicos e de biologia molecular. De início rápido, na maioria dos casos, muitas vezes é diagnosticada devido ao desenvolvimento de infecções, sangramento ou fadiga. Trata-se de uma doença geneticamente diversa, com 40% a 55% dos pacientes apresentando anormalidades genéticas que podem ser identificadas por meio de técnicas moleculares.
Como os painéis genéticos auxiliam no diagnóstico?
A expansão do conhecimento das bases genéticas das neoplasias mieloides permitiu a identificação de uma extensa gama de variantes genéticas associadas às doenças. Assim, a utilização de exames de painéis moleculares desempenha um papel crucial para o cuidado do paciente, pois possibilita a identificação de anormalidades genéticas ou moleculares, fornecendo informações valiosas para o diagnóstico.
Os métodos diagnósticos tradicionais, que dependem da análise morfológica e imunofenotípica de células da medula óssea ou sangue periférico, ainda têm importância para o direcionamento, mas possuem limitações para a definição do diagnóstico final. Por outro lado, os testes de biologia molecular podem detectar variantes ou rearranjos genéticos específicos, permitindo resultados mais precisos e conclusivos.
A identificação de alterações moleculares é essencial também para a estratificação de risco e o direcionamento terapêutico das neoplasias mieloides. Diferentes variantes ou alterações genéticas podem indicar agressividade da doença, resposta ao tratamento e prognósticos variados. Ao identificar marcadores moleculares, pode-se classificar os pacientes em grupos de risco distintos, possibilitando abordagens terapêuticas personalizadas.
Portanto, o Sequenciamento de Nova Geração (NGS) corresponde, atualmente, ao padrão-ouro para classificação, categorização prognóstica e direcionamento terapêutico das neoplasias mieloides.
Painel genético para neoplasias mieloides
O painel genético para neoplasias mieloides é um teste capaz de analisar genes completos, “hotspots” e as principais fusões gênicas associadas à leucemia mieloide aguda, neoplasias mielodisplásicas e neoplasias mieloproliferativas crônicas.
O painel baseia-se no NGS como ferramenta para o sequenciamento simultâneo e em larga escala de milhões de fragmentos de DNA e RNA, os quais são processados através da biologia molecular para posterior análise e identificação das mutações de interesse, utilizando técnicas de bioinformática, conforme descritas abaixo.
Análises de RNA
No RNA, são analisadas fusões gênicas envolvendo 29 genes “drivers”: ABL1, ALK, BCL2, BRAF, CCND1, CREBBP, EGFR, ETV6, FGFR1, FGFR2, FUS, HMGA2, JAK2, KMT2A, MECOM, MET, MLLT10, MLLT3, MYBL1, MYH11, NTRK3, NUP214, PDGFRA, PDGFRB, RARA, RBM15, RUNX1, TCF3, TFE3.
No total, o painel pode avaliar 688 fusões distintas associadas a neoplasias mieloides.
Análises de DNA
O painel é capaz de analisar variantes de nucleotídeo único (SNV) e inserções e deleções (INDEL) em 17 genes completos e 23 regiões hotspot.
SNV é a alteração de um único nucleotídeo na sequência de DNA ou, em outras palavras, a troca de um nucleotídeo por outro. Já a INDEL consiste em adições ou perdas de uma ou mais bases consecutivas na sequência do DNA. São abundantes em genomas humanos, sendo a INDEL o segundo tipo de variação genética mais comum.
- Genes (exons analisados): TET2 (1 a 9); IKZF1 (1, 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9); EZH2 (1 a 19); ETV6 (1 a 8); SH2B3 (1, 2, 3, 4, 6, 7, 8); RB1 (1 a 27); PRPF8 (1 a 42); TP53 (1, 2, 3, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12); NF1 (1 a 58); CALR (1, 2, 3, 4, 5, 7, 8, 9); CEBPA (1); ASXL1 (1 a 13); RUNX1 (1 a 9); ZRSR2 (1 a 11); BCOR (1 a 14); STAG2 (1 a 33); PHF6 (1 a 9);
- Regiões hotspot: CSF3R (1, 2, 3); MPL (1, 2, 3, 4); NRAS (1, 2, 3); DNMT3A (1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13); SF3B1 (1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8); IDH1 (1); MYD88 (1, 2); GATA2 (1, 2); KIT (1, 2, 10, 11, 13, 17); NPM1 (1); BRAF (1, 2, 11, 13, 15, 16, 17, 18); JAK2 (1, 2, 3, 4); ABL1 (1, 2, 3, 4, 5, 6); HRAS (1, 2); WT1 (1, 2); CBL (1, 2); KRAS (1); PTPN11 (1, 2, 3); FLT3 (1, 2, 10, 11, 14, 17); IDH2 (1); SRSF2 (1); SETBP1 (1); U2AF1 (1).
É importante destacar que os resultados para as variantes ITD e TKD no gene FLT3 são liberados individualmente, e o painel não é indicado para o monitoramento de doença residual mínima.
Como o exame é realizado?
O teste pode ser feito utilizando amostras da medula óssea ou de sangue periférico do paciente, ambos conservados em tubos com EDTA. As amostras devem ser encaminhadas devidamente identificadas, sob refrigeração (2 a 8ºC, não congeladas) e não devem ser submetidas a agitação mecânica. Não há necessidade de realização de jejum pelo paciente.
Inicialmente, o DNA e o RNA são extraídos das amostras biológicas e analisados por PCR/RT-PCR, seguido posteriormente pelo NGS. Após, por meio de uma plataforma de bioinformática, as informações do sequenciamento são analisadas para identificação dos genes de interesse (descritos anteriormente).
O resultado final é emitido pelo laudo técnico, conforme o conhecimento científico atual, uma vez que a interpretação dos resultados e a classificação das mutações podem mudar com o avanço do conhecimento médico ou a melhoria das ferramentas de análise de dados.
Cabe ressaltar que a correlação com os achados clínicos, histopatológicos e laboratoriais é necessária para a interpretação final dos resultados do painel genético, sendo de responsabilidade do médico especialista.
Quer ampliar ainda mais seu conhecimento sobre a utilidade clínica dos exames laboratoriais? Então, não deixe de conferir o conteúdo sobre como interpretar o hemograma, que fornece dicas valiosas para ajudar você na prática médica.
Referências:
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